明星实验服务:Western Blot技术服务
背景 :
蛋白免疫印迹(Western Blot)是将电泳分离后的细胞或组织总蛋白质从凝胶转移到固相支持物NC膜或PVDF膜上,然后用特异性抗体检测某特定抗原的一种蛋白质检测技术,现已广泛应用于基因在蛋白水平的表达研究、抗体活性检测和疾病早期诊断等多个方面。
原理:
经过SDS-PAGE(聚丙烯酰胺凝胶电泳)分离的蛋白质样品,转移到固相载体(例如硝酸纤维素薄膜)上,固相载体以非共价键形式吸附蛋白质,且能保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变。以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原,与对应的抗体起免疫反应,再与酶或同位素标记的第二抗体起反应,经过底物显色或放射自显影以检测电泳分离的特异性目的基因表达的蛋白成分。
操作流程:
1、蛋白样品制备及含量测定;
2、SDS-PAGE电泳;
3、转膜及免疫反应;
4、化学发光,显影,定影;
5、凝胶图象分析。
样品准备:
细胞样品:收集细胞后放入液氮中速冻保存或速冻24 h后转入-80°C冰箱保存。
组织样品:动物组织一般取材后立即放入液氮中速冻保存,液氮冻存24h后可转入-80 °C冰箱保存。
运输条件:样品运输条件根据实验样品的处理条件,可以选择液氮或者干冰运输,所有样品的处理和保存勿反复冻融。
实验完成提供:
1、实验中用到的所有重要设备的制造厂商,型号,操作参数,以及所有重要试剂的供应商,纯度等。
2、 所有实验操作的步骤一份。
3 、各部分的实验结果数据,包括:
3.1 各样本蛋白的浓度和质量;
3.2 内参基因和目的基因曝光胶片,并提供给各条带对应的样本名称;
3.3 各条带的灰度分析报告。
蛋白研究:蛋白提取、蛋白定量、Western Blot…核酸研究:核酸提取、PCR、核酸电泳… 抗体:单克隆抗体、多克隆抗体、酶标抗体… 细胞生物学:转染试剂、生化测定、细胞培养…
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