组织细胞总抗氧化能力检测试剂盒(Cu2+法) E2017
货号 | 产品名称 | 规格 | 价格(元) |
E2017 | 组织细胞总抗氧化能力检测试剂盒(Cu2+法) | 100T | 460 |
描述:组织细胞总抗氧化能力检测试剂盒(Cu2+法),即Total Antioxidant Capacity Assay Kit with Copper Ion Method是一种灵敏简单的检测总抗氧化能力(Total Antioxidant Capacity,TAOC)的试剂盒。
活性氧(Reactive oxygen species, ROS)主要包括羟基自由基、过氧化氢和超氧自由基。在细胞或组织的正常生理代谢过程中会产生活性氧,同时一些环境因子例如紫外照射、γ射线照射、化学损伤、细菌病毒感染也可以诱导活性氧的产生。尤其是以中性粒细胞、巨噬细胞为代表的免疫细胞,在各种诱导条件活化后,产生大量活性氧。活性氧除杀伤病原体外,还会导致细胞脂质、蛋白和DNA的损伤,诱发氧化应激(Oxidative stress),继而导致各种原发性疾病的发生和加重各种继发性疾病导致的机体损伤。
机体中存在多种抗氧化物,包括抗氧化大分子、酶和抗氧化小分子等,可以清除体内产生的各种活性氧,以阻止活性氧诱导的氧化应激(Oxidative stress)的产生。一个体系内的各种抗氧化大分子、抗氧化小分子和酶的总的水平体现了该体系内的TAOC。因此,测定细胞、组织、血浆和其它各种体液中TAOC具有非常重要的意义。
原理:Cu2+法测定TAOC的原理是利用样品中抗氧化物还原Cu2+为Cu+,Cu+与反应体系中Cu2+螯合剂螯合,通过570nm吸光度可以测定Cu+产生量,从而测定样品TAOC。利用具有强抗氧化能力的Trolox为标准品,可以计算样品以Trolox为参照的TAOC。
本试剂盒方便快捷,加入待测样品30分钟即可进行吸光度测定。并能利用蛋白沉淀试剂S沉淀蛋白后检测样品中小分子的抗氧化能力。
组成:(1)Cu+螯合剂溶液 25 ml/瓶 (2)Cu2+溶液 0.5 ml/管
(3)10 mM Trolox标准品溶液 0.5ml /管 (4)组织细胞裂解液 100ml
储存条件:-20℃储存,一年有效。
所需设备:酶标仪 最佳波长570nm
适用范围:测定各类动物培养细胞、组织等。
操作步骤:
1. 样品的准备
1.1 细胞样品的准备:收集新鲜细胞(如果是贴壁细胞,请用细胞刮刮下,不宜使用胰酶和EDTA消化),PBS洗涤细胞一次,离心收集细胞,吸尽上清。加入200μl预冷的组织细胞裂解液,超声破碎细胞释放其中的抗氧化物。4℃,10000g离心10分钟。取上清用于总抗氧化能力的测定。不立即测定的样品可以-70℃保存。如果样品中总抗氧化能力超出测定范围,可利用组织细胞裂解液适当稀释后测定,稀释倍数请通过预实验确定。
1.2 组织样品的准备:取20mg组织,加入400μl的预冷的组织细胞裂解液,用匀浆器冰浴匀浆。4℃,10000g离心10分钟。取上清用于总抗氧化能力的测定。不立即测定的样品可以-70℃保存。如果样品中总抗氧化能力超出测定范围,可利用组织细胞裂解液适当稀释后测定,稀释倍数请通过预实验确定。
2. 试剂盒的准备
总抗氧化能力检测工作液的配制:按下表比例取Cu+螯合剂溶液和Cu2+溶液配制总抗氧化能力检测工作液。
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1个样品 |
10个样品 |
50个样品 |
Cu+螯合剂溶液 |
200 μl |
2 ml |
10 ml |
Cu2+溶液 |
4 μl |
40μl |
200 μl |
3. 标准品的准备
利用PBS将10mM的Trolox溶液稀释成1、0.5、0.25、0.125、0.062、0.031 mM浓度的Trolox溶液,用于标准曲线测定。每次测定新鲜配制系列标准品稀释液。
4. 测定方法
4.1参考下表,使用96孔板,依次加入总抗氧化能力检测工作液、样品或标准品后,混匀,室温孵育30分钟。
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空白对照 |
标准曲线 |
样品 |
总抗氧化能力检测工作液 |
200 μl |
200 μl |
200 μl |
标准品 |
─ |
10 μl |
─ |
样品 |
─ |
─ |
10 μl |
PBS |
10 μl |
─ |
─ |
室温孵育 |
30 min |
30 min |
30 in |
4.2 孵育结束后,利用酶标仪测定A570nm。如果样品吸光度过高,可适当稀释样品后测定,如果样品吸光度过低,可适当冷冻干燥浓缩样品后测定。
5. 数据处理
利用标准品浓度为横坐标,吸光度值为纵坐标制作Trolox抗氧化能力标准曲线,并获得横纵坐标之间的函数关系式,然后利用标曲和各样品的吸光度值计算样品的总抗氧化能力。
参考文献:
1. Valko, M. et al., 2006. Free radicals and antioxidants in normal physiological functions and human disease. Int. J. Biochem. Cell.Bio., 39(1): 44-84.
2. Sies, H., 1997. Oxidative stress: oxidants and antioxidants. Exp. Physiol., 82(2): 291-295.
注意事项:
1. 本试剂盒检测涉及氧化还原反应,很多氧化剂和还原剂都会干扰试剂盒的测定,特别是巯基乙醇、DTT等含有巯基的试剂会严重干扰本试剂盒的测定,请尽量避免。
2.每次测定同时利用标准品制作标准曲线。
3. 初次使用试剂盒时,粉末试剂和小体积液体试剂请适当离心后使用。
4. 本产品仅限专业人员用于科学研究,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品。
5. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
蛋白研究:蛋白提取、蛋白定量、Western Blot…核酸研究:核酸提取、PCR、核酸电泳… 抗体:单克隆抗体、多克隆抗体、酶标抗体… 细胞生物学:转染试剂、生化测定、细胞培养…
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