组织细胞总抗氧化能力检测试剂盒(ABTS法) E2016
货号 |
产品名称 |
规格 |
价格(元) |
E2016 |
组织细胞总抗氧化能力检测试剂盒(ABTS法) |
100次 |
460 |
描述:组织细胞总抗氧化能力检测试剂盒(ABTS法),即Total Antioxidant Capacity Assay Kit with ABTS Method是一种灵敏简单的检测总抗氧化能力(Total Antioxidant Capacity,TAOC)的试剂盒。机体中存在多种抗氧化物,包括抗氧化大分子、酶和抗氧化小分子等,可以清除体内产生的各种活性氧,以阻止活性氧诱导的氧化应激(Oxidative stress)的产生。一个体系内的各种抗氧化大分子、抗氧化小分子和酶的总的水平体现了该体系内的TAOC。
规格:100次
储存:-20℃储存,12个月有效
操作步骤:
1. 样品的准备
1.1 细胞样品的准备:收集新鲜细胞(如果是贴壁细胞,请用细胞刮刮下,不宜使用胰酶和EDTA消化),PBS洗涤细胞一次,离心收集细胞,吸尽上清。加入200μl预冷的组织细胞裂解液,超声破碎细胞释放其中的抗氧化物。4℃,10000g离心10分钟。取上清用于总抗氧化能力的测定。不立即测定的样品可以-70℃保存。如果样品中总抗氧化能力超出测定范围,可利用组织细胞裂解液适当稀释后测定,稀释倍数请通过预实验确定。
1.2 组织样品的准备:取20mg组织,加入400μl的预冷的组织细胞裂解液,用匀浆器冰浴匀浆。4℃,10000g离心10分钟。取上清用于总抗氧化能力的测定。不立即测定的样品可以-70℃保存。如果样品中总抗氧化能力超出测定范围,可利用组织细胞裂解液适当稀释后测定,稀释倍数请通过预实验确定。
2. 试剂盒的准备
总抗氧化能力检测工作液的配制:按比例混合ABTS溶液和氧化剂溶液,室温避光放置6小时;然后利用PBS稀释30-50倍,测定A734nm,根据吸光度值调整稀释倍数,至吸光度A734nm为0.7±0.05,即为总抗氧化能力检测工作液。
3. 标准品的准备
利用PBS将10mM的Trolox溶液稀释成1、0.5、0.25、0.125、0.062、0.031 mM浓度的Trolox溶液,用于标准曲线测定。每次测定新鲜配制系列标准品稀释液。
4. 样本测定:
4.1使用96孔板,依次加入总抗氧化能力检测工作液、样品或标准品后,混匀,室温孵育5分钟。
4.2孵育结束后,利用酶标仪测定A734nm。如果样品吸光度过低,可适当稀释样品后测定,如果样品吸光度无明显下降,可适当冷冻干燥浓缩样品后测定。
5.数据处理
利用标准品浓度为横坐标,吸光度值为纵坐标制作Trolox抗氧化能力标准曲线,并获得横纵坐标之间的函数关系式,然后利用各样品的吸光度值计算样品的总抗氧化能力。对于细胞和组织样品,可以根据样品中蛋白浓度测定,计算每毫克蛋白中总抗氧化能力。
蛋白研究:蛋白提取、蛋白定量、Western Blot…核酸研究:核酸提取、PCR、核酸电泳… 抗体:单克隆抗体、多克隆抗体、酶标抗体… 细胞生物学:转染试剂、生化测定、细胞培养…
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