尿葡萄糖酶法测定试剂盒 E1009
货号 | 产品名称 | 规格 | 价格(元) |
E1009 | 尿葡萄糖酶法测定试剂盒 | 200次 | 680 |
描述:尿糖是指尿液中的糖类,主要是指尿中的葡萄糖。肥胖、肾脏疾病、糖尿病等都能够使血糖升高,尿糖含量也可能升高。正常人只有当血糖超过160~180mg/dl时,糖才能较多地从尿液中排出,形成尿糖。该试剂盒采用葡萄糖氧化酶法,是世界卫生组织和中国《全国临床检验操作规程》推荐的临床血糖检测方法。经过改良后,检测的灵敏度比普通方法提高约10倍,下限可达到5~10µmol/L,线性范围10~20000 µmol/L,胜任各种临床和基础研究的实验测量。
原理:根据Trinder反应原理1,2,葡萄糖在葡萄糖氧化酶(GOD)作用下生成葡萄糖酸和过氧化氢(H2O2);然后用过氧化物酶(POD)催化过氧化氢,使色原物质(4-氨基安替比林)生成醌亚胺,颜色的深浅与葡萄糖浓度成正比。
用途:测定人及动物尿液、血清、血浆、脑脊液、组织细胞孵育液及其裂解液等样品中的葡萄糖含量。
组成 (205次微量检测, 50次1ml检测):
(1) 0.5ml葡萄糖标准品10 mmol/L (等于180mg/100ml);
(2) 32ml试剂R1;(3) 8 ml试剂R2。4 ºC保存6个月。
所需设备:721、722型可见光分光光度计、酶标仪、生化分析仪。最佳工作波长550-555nm, 如仪器无此波长建议优先选用570nm, 次选530、490nm。
操作步骤;
一. 工作溶液配制:按4:1的比例,取8ml试剂R1与2ml试剂R2混合得到10ml 工作溶液。当天使用或4ºC保存1周。
二.标准品稀释:10mM葡萄糖标准品用蒸馏水或与样本缓冲液一致的液体稀释为2000、1000、500、250、125、62.5、31.25、15.625µM。注意设置0浓度对照反应管。由于葡萄糖测定反应的线性关系甚好且范围很宽,通常设置黑体标记的4管即可,一般不需要设置大于2~10mM的标准管,以此得到的标准曲线用来测定大于2mM葡萄糖浓度通常不会失真。世界卫生组织(WHO)推荐也可仅设置单一浓度的标准管。注意:不能使用用户自己简单配制的葡萄糖标准溶液。
三、葡萄糖含量测定:
1. 参见下表加样。先加标准品或待测样品,后加工作溶液。可依据葡萄糖浓度高低微量调整样品与工作液体积比例。超出线性范围可适当稀释。
2. 37ºC 反应20min (15~30min)或25ºC室温反应30min但灵敏度略降。反应平衡后颜色在60min内稳定。
3. 先用蒸馏水+工作液空白管调零,然后测定各管OD5值。
4. 绘制标准曲线并计算葡萄糖浓度。
附Excel作图步骤:各标准管OD值为y轴,浓度为x轴。(1)鼠标左键圈住数据,点击做图向导,选择-散点图-,点击-完成-。(2)鼠标右键点图上的某一点,点击-添加趋势线-,点击-选项-,点击-显示公式-和-R2值-。
5. 如果仅用单一标准管:葡萄糖浓度(mmol/L) = 标准品浓度 × (样品管OD-空白管OD) / (标准管OD-空白管OD)。
加样表
(可微量调整样品与工作液体积比例)
96孔微板测试,反应体积200μl |
比色杯测试,反应体积800 μl |
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空白管 |
标准管 |
样品管 |
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空白管 |
标准管 |
样品管 |
蒸馏水μl |
5 |
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蒸馏水μl |
20 |
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标准品μl |
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5 |
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标准品μl |
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20 |
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标品 μl |
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5 |
标品 μl |
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20 |
工作溶液μl |
195 |
195 |
195 |
工作溶液μl |
780 |
780 |
780 |
1. 人空腹血糖参考值3.89-6.11mmol/L (70-110 mg/dl),低血糖症临界水平2.7-3.89mmol/L,高血糖症临界水平6.11-7.22mmol/L。不同单位之间的换算公式:1mmol/L = 0.0555mg/100ml (dl);1mmol/L × 18 = 1mg/100ml (dl)。
2. 检测线性范围0.02~20mmol/L。浓度超过20mmol/L用蒸馏水或生理盐水稀释1-2倍后测量。批内变异系数为0.7~2.0%,批间变异系数约为2%。准确度与精密度达到临床检测要求。
3. 《全国临床检验操作规程》指明测定血糖用草酸钾-氟化钠抗凝:每5ml血液加0.2ml 6%草酸钾-4%氟化钠;其优点是抑制糖酵解和分解,测得的葡萄糖浓度更接近真实;缺点是干扰其它生化检查项目。枸椽酸钠抗凝剂易引起溶血,也干扰许多生化检查项目。如必须用同一份标本做全套生化检测,可采用肝素钠抗凝剂。
4. 尿样应在在30分钟内完成测定。血清或血浆仍含大量血细胞,室温下糖酵解旺盛可消耗葡萄糖使测量值降低。室温放置1小时葡萄糖含量开始降低,3小时后明显下降。4 ºC保存血样葡萄糖稳定性明显增加。使用血浆测定葡萄糖浓度可能更接近真实浓度。相比之下用血清标本测得的葡萄糖浓度偏低,且随着样品放置时间延长而明显下降。
5. 细胞培养基上清应2000g离心10分钟,去除细胞的上清测定。
参考文献:
1. Trinder, P. (1969). Annals of Clin. Biochem. 6: 24 – 27.
2. Barham D and Trinder P. (1972). Analyst 97: 142 – 145
蛋白研究:蛋白提取、蛋白定量、Western Blot…核酸研究:核酸提取、PCR、核酸电泳… 抗体:单克隆抗体、多克隆抗体、酶标抗体… 细胞生物学:转染试剂、生化测定、细胞培养…
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