液体样本总谷胱甘肽检测试剂盒 E2005
货号 |
产品名称 |
规格 |
价格(元) |
E2005 |
液体样本总谷胱甘肽检测试剂盒 |
100次 |
480 |
描述:液体样本总谷胱苷肽检测试剂盒(Total Glutathione Assay Kit)是一种灵敏简单的检测总谷胱甘肽的试剂盒。总谷胱甘肽包括还原型谷胱甘肽(GSH)和氧化型谷胱甘肽(GSSG)。GSH 是细胞中巯基的主要来源,对于维护蛋白巯基适当的氧化还原状态有重要作用,动物细胞中GSH占总谷胱甘肽比例约90-95%。
规格:100次
储存:按说明书要求保存 12个月有效
操作步骤:
1. 样品的准备
蛋白沉淀试剂溶液配制:请于样本准备前,将试剂盒中提供的0.5g蛋白沉淀试剂S溶于10ml纯水中,如果一次实验不需要使用10ml,请根据需要称取配制成5%的水溶液。
血浆样品或红细胞的准备:取新鲜血液,600g离心10分钟,上清为血浆。对于沉淀中红细胞,利用PBS洗涤2次。取约50μl的血浆或红细胞,加入50μl的蛋白沉淀试剂S溶液,充分涡旋,冰浴10分钟。4℃,10000g离心10分钟。取上清用于总谷胱甘肽的测定。不立即测定的样品可以-70℃保存。血浆样品可取10μl直接测定或利用蛋白沉淀试剂S溶液稀释2-5倍后测定,红细胞样品一般需利用蛋白沉淀试剂S溶液稀释5-10倍后测定。
2. 试剂盒的准备
2.1 GSH储备液的配制:在本试剂盒提供的6mg GSH中加入1ml的纯水,溶解并混匀,即为GSH储备液,浓度为20mM。
2.2 DTNB储备液的配制:在本试剂盒提供的4mg DTNB中加入1ml本试剂盒提供的DMSO溶解并混匀,即为DTNB储备液,浓度为10mM。
2.3 NADPH储备液的配制:在本试剂盒提供的5mg NADPH中加入1ml纯水,溶解并混匀,即为NADPH储备液,浓度为5mg/ml。
2.4 总谷胱甘肽检测工作液的配制:根据待测样品数配制适当量的总谷胱甘肽检测工作液,表中试剂按比例混合后即为总谷胱甘肽检测工作液。
2.5 NADPH工作液的配制:取NADPH储备液,利用总谷胱甘肽检测缓冲液稀释10倍,配制为0.5mg/ml的NADPH工作液。每检测一个样品需要50μl的0.5mg/ml NADPH。
3. 标准品的准备
将20mM的GSH储备液用蛋白去除试剂S溶液稀释成20、10、5、2.5、1.25、0.62μM浓度的GSH溶液,用于标准曲线测定。由于GSH在蛋白去除S溶液中不够稳定,每次测定需新鲜配制系列标准品稀释液。
4、测定方法
4.1使用96孔板,依次加入总谷胱甘肽检测工作液、样品或标准品后,混匀,25℃或室温孵育2分钟。
4.2 参考上表,各孔加入NADPH工作液50μl,25℃孵育20分钟。
4.3 各孔加入NADPH工作液50μl启动谷胱甘肽还原酶反应后,立即开始计时,并在5、10、20分钟等时间点测定A412nm。如果样品吸光度较低,可适当降低标准品浓度,延长反应时间进行样品测定。
5. 数据处理
利用GSH标准品浓度为横坐标,吸光度值为纵坐标制作标准曲线,并获得横纵坐标之间的函数关系式,然后利用标准曲线和各样品的吸光度值计算样品的总谷胱甘肽浓度。由于有多个时间点的标曲,可以选择标曲线性最好的时间点计算样品总谷胱甘肽浓度。
蛋白研究:蛋白提取、蛋白定量、Western Blot…核酸研究:核酸提取、PCR、核酸电泳… 抗体:单克隆抗体、多克隆抗体、酶标抗体… 细胞生物学:转染试剂、生化测定、细胞培养…
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