油脂食品甘油三酯(TG)酶法测定试剂盒 E1014
货号 | 产品名称 | 规格 | 价格(元) |
E1014-50 | 油脂食品甘油三酯(TG)酶法测定试剂盒 | 50次 | 650 |
E1014-105 | 油脂食品甘油三酯(TG)酶法测定试剂盒 | 105次 | 950 |
描述:甘油三酯(TG)是由甘油和脂肪酸酯化而成,是血脂的主要成分,也是机体重要的供能物质。
本试剂盒避免了有毒的氯仿甲醇提取、繁杂的氮气吹干和脂质复溶等步骤,采用高效能试剂进行组织细胞裂解和甘油三酯抽提,以及优化的GPO Trinder酶学反应组分和操作步骤。简单易行、灵敏度高,线性范围为 20-2000µmol/L。适用于生物、医学、农业、畜牧业、食品材料,用于精确测量固态食品材料、含高浓度油料样品中的甘油三酯。
适于测定样品
(1) 油料植物组织和种子、固态食品材料
(2) 血浆甘油三酯测定请使用 E1003-1
(3) 液态成品油或含高浓度油样品
测定原理:根据经典 GPO Trinder 反应,脂肪酶分解血甘油三酯为甘油。甘油激酶催化甘油生成 3-磷酸甘油,后者被磷酸甘油氧化酶氧化生成过氧化氢,在过氧化物酶催化下生色底物转化为苯醌亚胺,光密度值与甘油三酯浓度成正比。
组成 (105 次微板测定或 30 次 1 ml 比色杯测定)
(1) 裂解液 50 ml
(2) R1 试剂 16 ml
(3) R2 试剂 4 ml
(4) 4 mM 甘油标准品 1 ml
4 ºC 避光储存 6 月。
所需设备
721、722 型可见光分光光度计、酶标仪、生化分析仪。96
孔微板或比色杯光径 1cm。最佳工作波长 550nm,如无此波
长建议优先选用 570nm、次选 530、490nm。
操作步骤:
一 样本裂解:
用减量称重法对样品进行精确称重,建议按比例每1mg组织加20µl裂解液以减少样品间蛋白和脂质含量变异而产生的误差。加入裂解液后可用研钵对样品进行研磨,而后将研磨液转移到新的离心管中,室温静置10分钟。
二. 裂解液处理:
1. 取适量上清液转移到1.5ml离心管中,进行步骤2的操作。余下的裂解液可用BCA法蛋白定量试剂盒(#P1511)进行蛋白定量或-20ºC储存。
2. 70ºC 加热10分钟,组织量多时可能出现絮状沉淀。
3. 室温2000rpm离心5分钟,上层清液即可用于酶学测定。
二 工作溶液配制:按4:1比例,取4 ml试剂R1与1 ml试剂R2混合即可,立即使用或4ºC保存<1天,变色弃去。
三 标准品稀释:用蒸馏水、生理盐水或与样品缓冲液一致的液体,将4 mM甘油标准品倍比稀释为1000、500、250、125、62.5、31.25、15.625、7.8125 µmol/L,通常取其中4~6管即可,注意设置0浓度对照反应管。
四 甘油三酯浓度测定:
1. 参见下表进行加样。以96孔板为例,待测样品体积可在5、10、20µl之间,推荐以10µl为起始加样量。如果样品测量值超出线性范围,可进行适当稀释,最后根据稀释倍数计算浓度。
2. 37ºC或25ºC反应 15分钟。反应平衡后颜色在60分钟内稳定。
3. 先用蒸馏水+工作液的空白管调零,然后测定各管OD值。
4. 绘制标准曲线并计算甘油三酯浓度。
附Excel作图步骤:各标准管OD值为y轴,标准品浓度为x轴。(1)鼠标左键圈住数据,点击做图向导,选择-散点图-,点击-完成-。(2)鼠标右键点图上的某一点,点击-添加趋势线-,点击-选项-,点击-显示公式-和-R2值-。
5. 以每mg蛋白浓度或细胞数校正甘油三酯含量。
加样比例(检测范围20-2000µmol/L)
(可对样品和工作液比例进行微量调整)
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96孔微板测定 |
1 ml比色杯测定 |
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空白管 |
标准品 |
样品 |
空白管 |
标准品 |
样品 |
蒸馏水µl |
10 |
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35 |
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标准品µl |
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10 |
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35 |
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样品µl |
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10 |
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35 |
工作液µl |
190 |
190 |
190 |
665 |
665 |
665 |
说明:
1. 维生素C>0.18g/L、血红蛋白>2g/L、胆红素>0.25g/L、强还原剂二硫苏糖醇、巯基乙醇等会干扰测。高浓度EDTA会干扰测定。
2. 样本即使保存在-20ºC的环境下,甘油三酯也会自发水解。因此建议样品4ºC保存时间应短于24小时,当-70ºC保存时,也应不超过1个月。
3. 如果室温较低,应延长反应时间或在37ºC进行反应。
4. 不同类型组织和细胞内甘油三酯含量差别很大,应根据预实验调整初始的裂解液的加入量。对于脂肪组织而言,一般来说裂解液用量在20-30mg/ml即可。
参考文献:
1. Trinder, P. (1969). Ann. Clin. Biochem. 6: 24 – 27.
2. Barham D and Trinder P. (1972). Analyst 97: 142 – 145
蛋白研究:蛋白提取、蛋白定量、Western Blot…核酸研究:核酸提取、PCR、核酸电泳… 抗体:单克隆抗体、多克隆抗体、酶标抗体… 细胞生物学:转染试剂、生化测定、细胞培养…
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