血液高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)酶法测定试剂盒 E1017
货号 | 产品名称 | 规格 | 价格(元) |
E1017 | 血液高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)酶法测定试剂盒 | 250次 | 1120 |
描述:血浆中的脂质以脂蛋白-胆固醇-甘油三酯复合物形式存在。高密度脂蛋白HDL主要在肝脏和小肠生成,其主要功能是将肝外组织的胆固醇通过血液运回肝脏,转化为胆汁酸或直接通过胆汁从肠道排出体外,具有抗动脉粥样硬化作用。临床常规血脂检验包括四项:总胆固醇(total cholesterol,TC)、低密度脂蛋白-胆固醇(low density lipoprotein-cholesterol,LDL-C)和高密度脂蛋白-胆固醇(high density lipoprotein-cholesterol,HDL-C)、甘油三酯(triglyceride,TG)。血浆总胆固醇包括2/3的胆固醇酯和1/3的游离胆固醇。HDL-C 的测定需要预先分离不同密度的脂蛋白复合物,再测定其中的胆固醇含量。
规格:250次
储存:4ºC保存,6个月有效
操作步骤:
样品准备:人和动物的自然凝固后血清、EDTA抗凝血浆。不建议使用肝素抗凝。新鲜血液4ºC 2000 g离心5 min得到血浆,非抗凝血4ºC放置2小时得到血清。可4ºC存放数天或−20 ºC半年。如超过线性范围用生理盐水1:1~1:5稀释后测定。
所需设备:酶标仪、生化分析仪、可见光分光光度计。最佳工作波长550-555nm,如无此波长建议优先选用570、530、490nm。比色杯光径1cm。
标准品稀释:5 mM胆固醇标准品用无水乙醇倍比稀释为2500、1250、625、312.5、156、78、36 µmol/L。通常设置稀释4个点/管即可,注意设置0浓度对照反应管。立即使用,用毕弃去。
1. HDL-胆固醇分离步骤
1.1. 取50 μL血清或血浆(样品体积范围20-100 μL)
1.2. 加等体积50 μL的HDL捕获剂,振荡混匀。
1.3. 室温孵育10分钟。沉淀10-30分钟、室温或4ºC不影响结果,但条件要一致。
1.4. 2000 g离心20分钟。离心温度4~22度均可,不同样品离心条件要一致。
1.5. 上清液体含HDL-胆固醇。
2. HDL胆固醇测定步骤:
2.1. 配制测定工作液: 按4:1比例,取4 ml试剂R1与1 ml试剂R2混合,立即使用。4ºC保存<1天,变色弃去。
2.2. 取190 µl测定工作溶液,加入微板孔内。
2.3. 加入步骤1.5制备的上清液10μL。上清液体含HDL-胆固醇,放置后如有絮状物应再次离心。标准品管的加样量也是10 µl标准品。反应总体积200 µl。
2.4. 37ºC 20min (15~30min)。或25ºC室温反应30 min但灵敏度略低。反应平衡后颜色在60 min内稳定。
2.5. 先用蒸馏水空白管调零。然后测定各管OD550值。绘制标准曲线并计算总胆固醇浓度。Excel作图步骤参考:各标准管OD值为y轴,标准品浓度为x轴。(1)鼠标左键圈住数据,点击做图向导,选择-散点图-,点击-完成-。(2)鼠标右键点图上的某一点,点击-添加趋势线-,点击-选项-,点击-显示公式-和-R2值。
蛋白研究:蛋白提取、蛋白定量、Western Blot…核酸研究:核酸提取、PCR、核酸电泳… 抗体:单克隆抗体、多克隆抗体、酶标抗体… 细胞生物学:转染试剂、生化测定、细胞培养…
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