线粒体膜电位荧光探针--罗丹明 123 C0011
C0011-50 | 线粒体膜电位荧光探针-罗丹明123 | 50次 | 320元 |
C0011-100 | 线粒体膜电位荧光探针-罗丹明123 | 100次 | 530元 |
描述:线粒体膜电位荧光探针罗丹明123(Rh123)是一种可对活细胞线粒体染色的荧光染料,分子式: C21H17ClN2O3,分子量: 380.8243,为红色至棕色粉末。Rh123可以快速通过细胞膜,仅需几分钟就可以被具有活性的线粒体俘获,选择性地聚集在线粒体内,呈黄绿色荧光。对细胞没有任何毒性。Rh123广泛用作检测线粒体膜电位,也常用于细胞凋亡检测。
规格:(100次,50次减半)
罗丹明123荧光探针浓缩液(1mM) 100ul
储存: -20℃避光保存,一年有效
波长:最大激发波长为507nm,最大发射波长为529nm。可以使用激发波长511nm,发射波长535nm或激发波长488~505nm,发射波长530nm
操作步骤:
罗丹明123荧光探针工作液配制:
用无酚红、不含血清的新鲜培养基稀释罗丹明123荧光探针浓缩液(1mM)至1~20uM,最佳工作浓度建议预实验确定。
一般情况下,96孔板单孔细胞样本50ul工作液足够检测,6孔板单孔0.5ml工作液足够检测。
悬浮细胞:
1. 离心收集细胞,弃上清,用PBS洗涤两次。
2. 按比例将Rh123工作液加入细胞,37℃孵育30分钟至1小时。
3. 离心,去除Rh123缓冲液,用新鲜培养基洗涤细胞。
4. 加入4%组织细胞固定液(货号B1057)固定15~20分钟,用PBS洗涤。
5. 用荧光显微镜观察。
贴壁细胞:
1. 用载玻片准备细胞爬片,细胞数目应为5×104~5×105个/mL或消化收集细胞后,
2. 孵育该载玻片,细胞贴壁后用PBS或Hank's液洗涤细胞。
3. 将Rh123工作液加至附有细胞的载玻片上,37℃孵育30分钟至1小时。
4. 去除Rh123缓冲液,并用培养基洗涤细胞。
5. 加入10%福尔马林缓冲液固定15~20分钟,用PBS洗涤。
6. 荧光显微镜观察细胞。
也可以消化收集细胞后参照悬浮细胞处理方式进行膜电位检测。
结果:正常细胞线粒体呈黄绿色荧光;凋亡细胞荧光强度减弱或消失。
说明
1. 操作时需戴手套。
2. 罗丹明123为通透性染料,可以自由进入细胞。
3. 孵育时,必须避免光照。
4. 染色完成后,即可进行荧光检测分析。
蛋白研究:蛋白提取、蛋白定量、Western Blot…核酸研究:核酸提取、PCR、核酸电泳… 抗体:单克隆抗体、多克隆抗体、酶标抗体… 细胞生物学:转染试剂、生化测定、细胞培养…
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