血液总RNA提取试剂 R1040
货号 |
产品名称 |
规格 |
价格 |
R1040 |
血液总RNA提取试剂 |
100ml |
650元 |
描述:血液总RNA提取试剂特别加强了对液体标本如全血等RNA的提取能力。直接将液体标本与血液总RNA提取试剂混合即可,极大简化了样品的提取前处理过程。并且其提取能力强大,甚至可以从已经凝固的血液块中提取出高纯度的RNA。使用方法与RNAtrip 和TRIzol相似,可在30-60分钟内完成。获得的高纯度总RNA可用于RT-PCR、Northern Blot、RNA酶保护、Poly(A) mRNA纯化、体外翻译等实验。
规格:100ml
储存: 4 ℃密封避光保存12个月有效
操作步骤:
液体标本:全血、体液、尿液,悬浮细胞、病毒微生物样品等。每200ml液体样品加1 ml RNAtrip LS,置冰上。未抗凝的凝固血液按固体组织处理。
1. 将裂解物转移到1.5 ml离心管,置冰上10分钟。如需暂停操作,裂解物可冻存于-70 oC至少一个月。
2. 加入0.2体积的氯仿(0.2ml),充分颠倒混匀,冰上孵育1-5 分钟,溶液开始分相。有时分相不明显,不影响提取。
离心12,000g 4 oC 10 分钟,溶液分为两相。RNA保留于上层无色透明水相约0.6ml,下层为有机相,两相界面是一层薄膜其厚度与组织细胞类型和多少有关。小心吸出上层水相转移到新离心管,但应留0.5-1 mm厚水相,以免扰动和吸入下面的碎片和无机相。如吸入无机相和碎片,应将所取水相放回管中并重新离心10分钟,再吸取水相。这一点至关重要,违背此原则容易导致RNA降解和DNA污染。
3. 加入等体积异丙醇(0.5ml)于含有上清的新离心管中,充分混匀。冰上孵育10 分钟绰绰有余。但-20 oC 放置一至数小时,可回收几乎所有的RNA。如需尽可能多的RNA,或起始组织细胞的量很少,或用户需要暂停操作时,可以这样做。用更低的温度和更长的时间进行沉淀并不必要。
4. 离心, 12,000g,4 oC,10分钟。小心弃上清,管底可见少许黄白色RNA沉淀。如初始组织细胞量少,RNA沉淀用肉眼几乎难辨,但不影响实验。
5. 洗涤沉淀。立即加入1 ml 75%乙醇,颠倒混匀数次,12,000g 5分钟。弃上清,尽量吸去管壁上的液体。乙醇洗涤后RNA沉淀容易漂浮,勿倒掉RNA沉淀。此时可将RNA沉淀保存在75%乙醇中,4 oC一周或-20 oC一年。
6. 敞开管口空气干燥5-10分钟,RNA沉淀干燥至胶冻状即可。过分干燥将使RNA难以溶解。用50-100 ml DEPC处理的高压消毒纯水或TE溶解沉淀。如RNA难溶,可55 oC加热10分钟,或反复冻融数次助溶。RNA溶液可保存于-70 oC或液氮中;或加3倍体积乙醇-20 oC冻存,用时离心沉淀。
7. 测定OD值。计算RNA浓度和OD260/280比值。RNAtrip LS提取的RNA绝少蛋白污染,比值通常在1.6-2.0之间均属正常。OD260/280比值受很多因素影响。起始组织量过大或RNAtrip LS试剂过少,或吸取了有机相或碎片,将使OD260/280比值降低,应预以避免;RNA用水溶解或pH偏酸OD260/280偏低,而用TE或离子强度较高的溶液溶解时该比值较高,但均不影响RNA使用。用户应该知道,即便是已降解的RNA,该比值也能达到看似完美的2.0左右,因此该比值并非判断RNA降解与否的指标。可进行RNA琼脂糖电泳检查RNA完整性(见说明2)。
蛋白研究:蛋白提取、蛋白定量、Western Blot…核酸研究:核酸提取、PCR、核酸电泳… 抗体:单克隆抗体、多克隆抗体、酶标抗体… 细胞生物学:转染试剂、生化测定、细胞培养…
联系方式
通信地址:北京市昌平区振兴路36号2号楼3层330
客服电话:010-60781808 010-62027915
公司邮箱:sale@applygen.com
邮政编码:102299
版权所有 北京普利莱基因技术有限公司 Applygen Technologies Inc.
京ICP备05011537号-1