组织细胞变性裂解液 C1052
货号 |
产品名称 |
规格 |
价格 |
C1052-50 |
组织细胞变性裂解液 |
50ml |
150元 |
C1052-500 |
组织细胞变性裂解液 |
500ml |
1020元 |
描述: 变性细胞裂解液 (Denaturing Lysis Buffer)用于组织、细胞变性裂解提取总蛋白,适宜于如下几种情况:(1)抗原是不溶性蛋白,如不溶性的细胞骨架和膜蛋白或高度疏水蛋白;(2)抗原位点隐匿于蛋白高级折叠结构之中;(3)易集聚沉淀的蛋白;(4)体外翻译产生的蛋白。
规格: 50ml 500ml
储存:4℃保存 12个月有效
操作步骤:
制备细胞裂解产物:
1. 800g 4℃离心 5 分钟收集培养细胞,估计细胞离心后的体积(PCV, 106 cells=~20 μl, 107 cells=~100 μl PCV);每 50-100 μl PCV 加入 5 倍体积变性组织细胞裂解缓冲液(250-500 μl),冰浴放置 10 分钟,每隔 5 分钟在漩涡混合仪上振荡 30 秒;
2. 12000g 4℃离心 10 分钟,将上清转移到新的离心管中,即得细胞总蛋白产物;
注意:如所得蛋白产物较为粘稠,可先 95℃加热 5 分钟,迅速冰浴 5 分钟,然后再进行步骤 3
制备组织裂解产物:
1. 取 50-100 mg 组织在冰上剪成碎片,用预冷的 PBS 洗涤 2 次离心弃去 PBS;
2. 加入 0.5-1 ml 预冷的变性组织细胞裂解缓冲液;
3. 4℃用玻璃匀浆器匀浆 20-40 次,直到 95%的细胞被破碎,然后在冰浴中放置 10 分钟,并每隔5 分钟在漩涡混合仪上振荡 30 秒;
4. 12000g 4℃离心 10 分钟,将上清转移到新的离心管中,即得组织总蛋白产物;
注意:如所得蛋白产物较为粘稠,可先 95℃加热 5 分钟,迅速冰浴 5 分钟,然后再进行步骤 4
说明:
1. 在转移上清液时不要吸入底部的沉淀物;
2. 在做免疫沉淀或免疫共沉淀时最好在实验前进行蛋白的提取,以避免某些不稳定蛋白的降解;
3. 在该裂解缓冲液中未加入蛋白酶抑制剂,用户可自行选择进行添加。
蛋白研究:蛋白提取、蛋白定量、Western Blot…核酸研究:核酸提取、PCR、核酸电泳… 抗体:单克隆抗体、多克隆抗体、酶标抗体… 细胞生物学:转染试剂、生化测定、细胞培养…
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